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03-23
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料(四)
抗体催化的原理
1986年，由P.G.schultz和R.A.Lerner分别领导的两个小组同时证明抗体具有催化活性。针对一个四面体带电荷的磷酸酯半抗原产生的抗体，能有选择性地催化相应的碳酸脂和羧酸脂的水解反应。他们将这种有催化活性的抗体称为催化性抗体(catalytic antibody)，又称抗体酶(abozyme)。催化抗体的作用取决于底物分子水解时的转换态(transition state)。
转换态的分子结构是分子活化后的一种结构状态，处于转换态的分子具有最高的活化能，分子表现极性。处于这种状态的分子也是最不稳定的，能与这种分子结合的酶或者抗体会使某些化学键发生断裂(如酯键，碳键，胺键等)起到酶解作用。可见抗体酶的作用与天然的蛋白质酶非常相似。抗体酶也表现出对底物的专一性，对立体结构的专一性。
在饱和动力学与竞争性抑制方面都与常规酶相似。所以抗体酶的发现打破了只有常规酶才有的分子识别和加速催化反应的传统概念，为酶工程学开创了新的领域。
四种树突状细胞简介
1.滤泡树突状细胞(folliculardendritic cell，FDC)
FDC定居于淋巴结浅皮质区淋巴滤泡生发中心内。FDC与抗原抗体复合物高度亲合力，能够捕获和滞留抗原，并在记忆B细胞发育中起重要作用，是参与再次免疫应答的APC.
2.淋巴样树突状细胞(Lymphoiddendritic cell，LDC)
LDC主要分布在淋巴结和脾内，在移植排斥反应中起重要作用。
3.并指状细胞(interdigitatingcell，IDC)
IDC主要定位于淋巴组织胸腺依赖区，可能由皮肤Langerhans细胞移行而来。在淋巴组织中，IDC的星状突起插入其它细胞之间，故命名为并指状细胞。它可能是淋巴结中主要的APC，并对抗原特异性T细胞具有很强刺激作用。
4.朗格罕细胞(Langerhanscell，LC)
LC位于表皮和胃肠上皮，其特征性胞内结构是胞浆中的柱状Birbeck颗粒，该颗粒参与LC抗原呈递作用的各个环节。LC是定居在皮肤中的APC，约占皮肤细胞总数的5%～10%，在介导接触性皮肤超敏反应中起关键作用。
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03-23
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料(三)
c肽释放试验临床意义
C肽释放试验的做法与注意事项与葡萄糖耐量试验，胰岛素释放试验相同，它的临床意义是：
(1)测定C肽，有助于糖尿病的临床分型，有助于了解患者的胰岛功能。
(2)因为C肽不受胰岛素抗体干扰，对接受胰岛素治疗的患者，可直接测定C肽浓度，以判定患者的胰岛β细胞功能。
(3)可鉴别低血糖的原因。若C肽超过正常，可认为是胰岛素分泌过多所致，如C肽低于正常，则为其它原因所致。
(4)C肽测定有助于胰岛细胞瘤的诊断及判断胰岛素瘤手术效果，胰岛素瘤血中C肽水平偏高，若手术后血中C肽水平仍高，说明有残留的瘤组织，若随访中C肽水平不断上升，揭示肿瘤有复发或转移的可能。
甲型肝炎抗体
甲型肝炎抗体是针对甲肝的一种特异性抗体。甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)主要通过手-口途径传播，潜伏期15～50天，平均28天。
病毒常在患者血清ALT升高前的5～6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2～3周后，随血清中特异抗体的产生，血清和粪便的传染性就逐渐消失。
并指状细胞介绍
并指状细胞主要定位于淋巴组织胸腺依赖区，可能由皮肤Langerhans细胞移行而来。
在淋巴组织中，IDC的星状突起插入其它细胞之间，故命名为并指状细胞。
它可能是淋巴结中主要的APC，并对抗原特异性T细胞具有很强刺激作用。
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料(二)
并指状细胞
并指状细胞介绍：
并指状细胞主要定位于淋巴组织胸腺依赖区，可能由皮肤Langerhans细胞移行而来。
在淋巴组织中，IDC的星状突起插入其它细胞之间，故命名为并指状细胞。
它可能是淋巴结中主要的APC，并对抗原特异性T细胞具有很强刺激作用。
白蛋白生理作用
(1)维持血浆胶体渗透压的恒定
白蛋白是血浆中含量最多、分子最小、溶解度大、功能较多的一种蛋白质。血浆胶体渗透压的维持主要依靠血浆中的白蛋白，胶体渗透压是使静脉端组织间液重返回血管内的主要动力。当血浆白蛋白因病理条件引起下降时，血浆的胶体渗透压也随之下降，可导致血液中的水份过多进入组织液而出现水肿。
(2)血浆白蛋白的运输功能
血浆白蛋白能与体内许多难溶性的小分子有机物和无机离子可逆地结合形成易溶性的复合物，成为这些物质在血液循环中的运输形式。由此可见白蛋白属于非专一性的运输蛋白，在生理上具有重要性，与人体的健康密切相关。
(3)血浆白蛋白的其它生理作用
血浆中白蛋白的含量远比球蛋白多，亲水作用又比球蛋白大，这使血浆中的白蛋白对球蛋白起到一种胶体保护的稳定作用。当肝脏功能障碍引起白蛋白合成不足时，可使血浆球蛋白失去胶体保护作用，稳定性下降。血浆球蛋白的稳定性下降，将严重影响这些物质在体内的代谢、利用，引起相应的症状。此外，白蛋白还是人体内一种重要的营养物质。白蛋白在血浆中也不断地进行着代谢更新，血浆白蛋白分解产生的氨基酸，可用于合成组织蛋白，氧化分解以供应能量或转变成其它含氮物质。
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料(一)
颗粒性抗原的制备
免疫原是诱导机体产生抗体、并能与抗体发生反应的物质。能否制得合格的抗体由许多因素决定，而能否制备合格的免疫原则是其前提条件。而且作为诊断试剂的抗原也必须是单一特异性的，即纯化的抗原。
自然众多的物质皆可成为免疫原，但绝少是单一成分(除非是合成的基因工程制备的)，所以必须将某个抗原从复杂的组分中提取出单一的成分。下面介绍有代表性的免疫原制备方法。
颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。最常用的细胞抗原为制备溶血素用的绵羊红细胞。这种抗原制备比较简单，采集新鲜绵羊红细胞，以无菌盐水洗涤 3次(每次离心2000r/min10min)，最后配成106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。
细菌抗原多用液体或固体培养物经集菌后处理。H抗原用有动力的菌株，菌液用0.3%～0.5%甲醛处理，而O抗原则需要100℃加温2～2.5h后应用。Vi抗原则应在杀菌后再加0.5 %～1%氯化钙溶液。有时虫卵也可做成抗原，如日本血吸虫卵抗原可制成悬液供免疫用。
有些细胞膜成分，如组织细胞膜、血细胞膜经打碎后亦可制成颗粒抗原。颗粒抗原悬液呈乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少使用佐剂作皮内注射。
诱导免疫耐受
诱导受体对移植物的免疫耐受，是最理想的排斥反应防治措施。目前限于研究阶段，尚未应用于临床。
研究思路：
1.应用大剂量天然可溶性或人工合成的供者HLA分子，通过封闭同种抗原特异性T细胞的TCR，以诱导受者特异性T细胞凋亡。
2.输注可溶性CTLA～4，阻断被移植组织细胞的B7与受者T细胞表面CD28的结合，干扰共刺激信号的形成。
3.阻断CD40～CD40L、CD2～LFA3等膜分子的相互作用，使T细胞功能障碍。
4.借助基因工程技术制备基因修饰的树突状细胞，介导特异性耐受。
5.T细胞疫苗，诱导抗独特型抗体的产生，破坏移植物特异性T细胞
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...03-23
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料(10)
免疫记忆细胞
在载体-半抗原效应的研究中，已证明T细胞及B细胞都与免疫记忆有关。即在免疫应答过程中，既能产生B记忆细胞(Bm)，也能产生TH记忆(THm)。免疫记忆现象可以解释为对特异抗原应答的淋巴细胞数量增加的现象。
用有限稀释法计数在载体-半抗原效应中免疫记忆细胞的数量变化，发现在T细胞群中对载体特异的T细胞辅助活性比初次应答可增强10倍。这不仅是由于TH细胞数量的增加，也反映了TH功能的增强所致。
有相同方法也证明了在再次应答中对半抗原特异的细胞数量亦增加，由其产生抗体性质的变化，表明B记忆细胞也伴随有质的变化。
风湿因子
类风湿因子(RF)是抗变性IgG的自身抗体，主要为19S的IgM，也可见7S的IgG及IgA.它能与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集反应。RF主要出现在类风湿性关节炎患者，约70%～90%的血清中和约60%的滑漠液中可检出IgG类RF，这很可能是自身IgG变性所引起的一种自身免疫应答的表现。
IgG是感染等原因诱导的免疫应答中的主干抗体，这些抗体与相应抗原结合时会发生变性;此外，在炎症等病理条件下滑漠或其他部位可能产生不正常的IgG;这些变性IgG就构成自身抗原，刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体。滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合而形成中等大小的免疫复合物，比血清中的IgM类RF更具有致病意义，因为这一类免疫复合物易于沉积在关节滑膜等部位，可激活补体，形成慢性渐进性免疫炎症性损伤。
RF的检测最初是用致敏绵羊红细胞凝集试验(Rose-Waaler法)进行检测，目前最常采用IgG吸附的胶乳颗粒凝集试验;但此法的灵敏度和特异性均不高，而且只能检出血清中的IgM类RF.IgG类和IgA类RF则需要用RIA或ELISA等方法检测。
RF在类风湿性关节炎患者中的检出率很高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，如对年轻女性应进行RA和风湿热间的鉴别;而对非活动期RA的诊断，需参考病史。但RF也象ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。在SLE病人均有50%RF阳性，在其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎及老年人中均可有不同程度的阳性率。
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2018年卫生资格《检验技士》备考资料（9）
医抗核抗体
抗核抗体泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE.ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。
ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。
（一）ANA的类型及意义
由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA.
1.抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。
2.抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA（dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，70%～90%的活动期SLE病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。抗ssDNA抗体可见于多种疾病中，特异性较差。
3.抗ENA抗体可提取性核抗原（ENA）多从动物的胸腺中提取。先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出细胞核；再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。ENA不含DNA，对核糖核酸酶敏感。近年来的研究表明，ENA可分为十几种，现仅介绍几种主要的ENA及其相应抗体。
（1）抗PNP抗体：PNA即核糖核蛋白，对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加热561h变性。抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。高效价的抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义，而低效价的抗PNP抗体可在SIE患者中发现。
（2）抗Sm抗体：该抗体在一名Smith姓的患者血中首次发现，便以其名字的前两个字母命名。Sm抗原系非核酸性糖蛋白，对DNase及RNase均不敏感，但经碘酸盐及胰蛋白酶处理后可被水解。抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一，但阳性率偏低，约为30%～4%；可能是SIE的一种回忆性抗体，故在非活动期亦可检出。若将抗dsDNA和抗Sm抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。
（3）抗SS-A抗体：SS-A为干燥综合征（SS）的A抗原，可从动物胸腺的胞浆中提取。抗SS-A抗体主要见于SS，但也可见于其他自身免疫病如SLE中。
（4）抗SS-B抗体：SS-B为SS的B抗原，亦可从动物胸腺或小鼠肝细胞浆中提取，可被胰蛋白酶、轻度加热或改变溶液pH而破坏。13%的SLE及30%的SS患者有抗SS-B抗体。
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